El kit de sustrato DAB ab64238 se usa para la tinción de IHC usando la enzima HRP / peroxidasa para la detección. El reactivo es estable hasta 6 horas después de mezclar los dos componentes.
DAB (3,3'Diaminobencidina) es el cromógeno más utilizado para la tinción inmunohistoquímica. En presencia de HRP / peroxidasa, DAB produce un precipitado marrón que es insoluble en alcohol.
Este producto es una forma de dos componentes que consta de un cromógeno DAB estable y refrigerante, y un sustrato DAB.
Protocolo IHC adecuado para usar con el kit de sustrato DAB:
Para secciones congeladas, omita los pasos 1 y 2.
1. Desparafinar y rehidratar la sección de tejido embebido en parafina fijado con formalina.
2. Use el tampón de recuperación de antígeno apropiado o enzima (dependiente de anticuerpo primario) para tratar secciones. Lavar 3 veces en tampón.
3. Agregue suficiente solución de bloqueo de peróxido de hidrógeno para cubrir las secciones. Incubar por 10 minutos. Lavar 2 veces en tampón. Si es necesario, use el bloqueo de avidina biotina.
4. Aplique bloque de proteínas (o suero normal de la misma especie que el anticuerpo secundario) e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente para bloquear la tinción de fondo inespecífica. Lavar una vez en tampón.
5. Aplicar anticuerpo primario en diluyente de anticuerpo e incubar.
6. Lavar 4 veces en tampón. Incubar el portaobjetos con anticuerpo secundario biotinilado (o anticuerpo secundario de polímero HRP y omitir el paso 7). Lavar 4 veces en tampón.
7. Aplicar estreptavidina-HRP e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente.
8. Enjuague 4 veces en tampón. Coloque el portaobjetos en el sustrato DAB ab64238 o sustrato AEC e incube hasta obtener el color deseado (1-10 minutos). Enjuague 4 veces en tampón.
9. Agregue suficientes gotas de hematoxilina para cubrir la sección. Incubar por 1 minuto.
10. Enjuague 7-8 veces en agua del grifo. Agregue medio de montaje para cubrir la sección.
Notas
Encuentre kits completos de IHC y reactivos para recuperación de antígeno, bloqueo, amplificación de señal, visualización, contratinción y montaje en la guía de kits y reactivos de IHC.